消痤饮总黄酮含量测定实验报告

　　1、仪器与材料

FA2004B型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；BP-Ⅱ型托盘天平；101AS-1型不锈钢数显电热恒温鼓风干燥箱；760MC紫外-可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；HHS-11-4B型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；芦丁对照品（批号：100080-200707）购自中国药品生物制品检定所；所用中药材均购自昆山医药有限公司，经鉴定符合《中国药典》2010年版一部项下标准。所用试剂均为分析纯。

　　2、方法与结果

2.3提取物得率的测定

精密量取供试品溶液30 mL，移至事先已干燥至恒重并已称重的蒸发皿中，水浴挥发至干后，在电热恒温鼓风干燥箱中于105 ℃干燥至恒重，称重。减去空蒸发皿质量，即得干膏重，计算其与所用药材的比值即为提取物得率，见表2。

2.4总黄酮含量测定

2.4.1测定波长的选择精密称取芦丁对照品适量，加60%（体积分数）乙醇使其溶解，制成质量浓度为0.2 mg·mL-1的'对照品溶液。精密吸取对照品溶液4 mL于25 mL容量瓶中，加入蒸馏水6 mL，加5%（质量浓度）NaNO2溶液1 mL，混匀，放置6 min，加10%（质量浓度）Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%（质量浓度）NaOH溶液10 mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min。精密移取“2.2”项下供试品溶液1 mL至25 mL容量瓶中，同法显色。采用紫外-可见分光光度法进行全波长扫描，对照品、供试品溶液均在506 nm处有最大吸收，故选择506 nm为测定波长。

2.4.2标准曲线的制备[3]分别精密吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL容量瓶中，按“2.4.1”项下方法显色，于506 nm测定吸光度，以芦丁对照品质量浓度（ρ）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=9.3773ρ-9.1×103，r=0.999 5，线性范围为7?474 ~44.844 μg·mL-1。

2.4.3含量测定精密吸取“2.2”项下供试品溶液1 mL，至25 mL容量瓶中，按“2.4.1”项下方法显色，于506 nm测定其吸光度，计算总黄酮的含量，见表2。方差分析见表3、4。表2正交试验结果与直观分析表3提取率方差分析表表4总黄酮含量方差分析表由表2、3可知，对提取物得率而言，因素B、D的影响具有统计学意义，因提取2次后杂质含量少于提取1次后的杂质含量，故选择较优方案为A2B3C2D2。由表2、4可知，对总黄酮含量而言，因素C、D的影响具有统计学意义，结合节能方面考虑，其较优的方案为A1B1C2D2。2个方案中C2、D2是共同选项。而因素B对总黄酮含量的影响无显着性，从提高提取物得率的角度出发应选择B3;因素A对2个测定指标的影响均无意义，故从简化工艺角度考虑选择A1。因此最佳提取工艺为A1B3C2D2，即浸渍时间为0.5 h，溶媒用量为13倍，煎煮次数为2次，醇沉体积分数为60%。

本试验通过对不同提取条件下消痤饮的提取物得率、总黄酮含量综合进行评定，发现溶媒用量、提取次数、醇沉体积分数是影响提取的关键因素，而浸渍时间影响较小。确定的最佳工艺条件为：浸渍时间为0.5 h，水用量为13倍，煎煮次数为2次，醇沉体积分数为60%。按此条件进行验证试验，结果表明该工艺稳定可行。